Продукция

Протеом киңлегендәге фосфориляция вакыйгаларын анализлау әле дә зур аналитик проблема булып тора, чөнки протеин фосфориляция челтәрләренең катлаулылыгы.Бу эштә без Lys-N, Lys-C, һәм трипсинның фосфопротеомның глобаль анализына үз өлешләрен кертү сәләтенә карап тулыландыруны бәялибез.Аз-рН көчле катион алмашуның чистартылган версиясе N-терминаллы ацетилатланган, фосфориатланган һәм модификацияләнмәгән пептидларны эффектив аеру өчен кулланылды.Барлыгы 5036 фосфопептидны өч фермент кушылмасы ярдәмендә 1 мг протеиннан <1% ялган табу дәрәҗәсе белән ачыкларга мөмкин.Безнең мәгълүматлар ачыклаганча, төрле протеазлар белән ясалган фосфопептид мәгълүматлар җыелмасы арасындагы капма-каршылык маргиналь булган, ә охшаш ике триптик мәгълүмат җыелмасы арасындагы охшашлык ким дигәндә 4 тапкырга югарырак булган.Шул рәвешле, Lys-N һәм трипсинны параллель куллану ачыкланган фосфопептидлар санын 72% арттырырга мөмкинлек бирде, d трипсин белән чагыштырганда, трипсинны кабатлау эксперименты 25% артуга китерде.Шулай итеп, трипсин һәм Lys-N мәгълүматларына гына игътибар иткәндә, без 4671 кирәк булмаган фосфопептидны ачыкладык.Ачыкланган сайтларны алга таба анализлау күрсәткәнчә, Lys-N һәм трипсин мәгълүматлар җыелмасы төрле фосфориляция мотивларында баетылган, бу фосфопротеом анализларында мультипротеаз ысулларының бик кыйммәтле булуын раслый.