Продукция

Энзиматик активлыкны үзгәртү өчен синхрон мутацияләрнең эффектларын берләштерү ысулын алдан әйтеп булмый, чөнки бу эффектлар гел сызыклы рәвештә өстәмә булмый.Димәк, субстратны бәйләгән аминокислота калдыкларының синхрон мутацияләренең эффектларына характеристика ферментларның субстрат үзенчәлеген аңлауга зур өлеш кертә ала.Сподоптера фругиперда (Сфбетагли) бета-гликозидасында Q39 һәм E451 калдыклары субстрат белән үзара бәйләнештә торалар, һәм бу субстрат үзенчәлеген билгеләү өчен бик кирәк.Сфбетаглының икеләтә мутанты (A451E39, S451E39 һәм S451N39) сайтка юнәлтелгән мутагенез белән әзерләнгән, бактерияләрдә чагылган һәм якынлык хроматографиясе ярдәмендә чистартылган.Бу ферментлар р-нитрофенил бета-галактозид һәм р-нитрофенил бета-фукозидны субстратлар итеп кулланып характерланганнар.Q39 һәм E451 позицияләрендә сайтка юнәлтелгән мутацияләрне үз эченә алган Сфбетаглы бер һәм икеләтә мутацияләр өчен k мәче / Км катнашлыгы икеләтә мутациянең ESdouble хәнҗәренең (фермент-күчү дәүләт комплексы) ирекле энергиясенә тәэсирен күрсәтү өчен кулланылды. хәнҗәр) бер мутациядән килгән эффектлар суммасы түгел (Gdouble хәнҗәр һәм Gdouble хәнҗәр).Gdouble хәнҗәрендәге бу аерма бер мутациянең эффектларының өлешчә каплануын күрсәтә.Димәк, бу уртак эффект Gdouble хәнҗәрендә бер генә тапкыр санала.Бета-гликозидазлар турында кристаллографик мәгълүматлар Q39 һәм E451 калдыклары һәм субстратның шул ук гидроксил төркеме катнаш видород бәйләнешенең булуын ачыклый.Шуңа күрә, термодинамик һәм кристаллографик мәгълүматлар Q39 һәм E451 калдыкларының субстрат белән үзара бәйләнешләренә үзара йогынты ясавын күрсәтәләр.