Продукция

Гликозилтрансфералар өчен яңа югары җитештерүчән сыек хроматография анализы, антранил кислотасы һәм флюоресенцияне ачыклау белән дериватизациягә нигезләнгән.

Ass1-4 галактозилтрансфераз (GalT-1) һәм α2-6 сиалилтрансфераз (ST-6) эшчәнлеген үлчәү өчен 2-аминобензой кислотасының (2AA; антранил кислотасы, AA) уникаль маркировкалау химиясе ярдәмендә эшләнде. хроматография (HPLC) флуоресцентны ачыклау белән (Анумула KR. 2006. Гликопротеин углеводларының югары җитештерүчән сыек хроматографик анализы өчен флуоресцент дериватизация ысулларында алга китеш. Анал Биохим. 350: 1-23).N-Ацетилглукосамин (GlcNAc) һәм N-ацетиллактозамин, тиешенчә, GalT-1 һәм ST-6 донорлары буларак, уридин дифосфат (UDP) -галактоза һәм цитидин монофосфат (CMP) -N-ацетилнеурамин кислотасы (NANA) буларак кулланылган.Энзиматик продуктлар AA белән ситуада маркировкаланган һәм нормаль фаз шартларын кулланып TSKgel Amide 80 баганасындагы субстратлардан аерылган.Фермент берәмлекләре иң югары өлкәләрдән Gal-β1-4GlcNAc һәм NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc стандартлары белән чагыштырганда билгеләнде.Сызыклылык (вакыт һәм фермент концентрациясе), төгәллек (эчтәлек һәм арада) һәм анализлар өчен репродуктивлык билгеләнде.Тикшеренүләр изоляция һәм чистарту вакытында фермент эшчәнлеген күзәтүдә файдалы дип табылды.Тикшеренүләр бик сизгер һәм традицион радиоактив шикәр нигезендәге үлчәмнәргә тигез яки яхшырак башкарылды.Консерв форматы шулай ук ​​углеводлар кабул итүчеләрнең маркировкасын киметүче шартларда булса, башка трансферазларның активлыгын үлчәү өчен кулланылырга мөмкин.Гликопротеин кабул итүчеләр өчен анализ IgG ярдәмендә эшләнде.IgG гликаннарын аеру өчен кыска HPLC профильләштерү ысулы эшләнде (G0, G1, G2, моно- һәм диализацияләнгән), бу GalT-1 һәм ST-6 эшчәнлеген тиз билгеләргә ярдәм итте.Моннан тыш, бу профильле ысул IgG гликаннарының клиник шартларда үзгәрүен күзәтү өчен файдалы булырга тиеш.